Статьи

Обнаружение вируса энтеббе летучей мыши через 54 года

  1. Таблица 1

Первоначально исследования вируса летучей мыши в Уганде были инициированы в середине 1950-х годов выделением вируса бешенства и нового флавивируса, который впоследствии стал известен как вирус Рио-Браво (Flaviviridae: Flavivirus ) из слюнных желез насекомоядных летучих мышей в Соединенных Штатах. 1 - 3 Впоследствии исследователи из Угандийского научно-исследовательского института вирусов (UVRI) собирали летучих мышей с чердака UVRI, иссекали слюнные железы и изолировали вирусы путем внутримозговой инокуляции экстрактов растертой слюнной железы новорожденным мышам. 4 , 5 Эта первая попытка привела к выделению вируса слюнной железы летучей мыши Энтеббе, штамма IL-30 (Flaviviridae: Flavivirus ), из маленькой летучей мыши с свободным хвостом ( Chaerephon pumilus ) (Cretzchmar). 4 , 5 Затем таксон был признан одним из его синонимов: Tadarida ( Chaerephon ) limbata (Peters). Люмсден и другие 4 , 5 определили, что этот изолят был новым флавивирусом с помощью серии тестов нейтрализации с использованием иммунной сыворотки против 20 арбовирусов, а также против вируса Рио-Браво. К 1964 году исследования по вирусам летучих мышей расширились в UVRI, и выборка из 1022 дополнительных летучих мышей позволила получить 14 штаммов вирусов, включая вирус летучей мыши Дакар (Flaviviridae: Flavivirus ), также из маленьких летучих мышей с свободным хвостом, и вирус летучей мыши Bukalasa (Flaviviridae: Flavivirus ) из Анголы летучие мыши со свободным хвостом ( Mops condylurus ) (А. Смит). 6 Выделение вируса летучей мыши на горе Элгон (Rhabdoviridae: Ledantevirus ) последовало вскоре после этого из красноречивой подковообразной летучей мыши ( Rhinolophus hildebrandtii eloquens ) (К. Андерсон), захваченной в Кении, с выделением и охарактеризованием вируса в УФРИ. 7 , 8 Дополнительные открытия вируса летучей мыши в Уганде позже включали вирус Касокеро (Bunyaviridae, неназначенный) из египетской фруктовой летучей мыши ( Rousettus aegyptiacus ) (Э. Жоффруа). 9 Вирус летучей мыши Энтеббе (ENTV, переименованный), вирус летучей мыши Букаласа и вирус летучей мыши Дакара были выделены из насекомоядных летучих мышей, захваченных на чердаке UVRI. 10 Серологические исследования показали, что распространенность инфекции ENTV в диких популяциях маленьких летучих мышей со свободным хвостом была высокой, но после первоначального открытия ENTV никогда не был снова изолирован. 10 , 11

Чтобы проконтролировать эти ранние исследования, в Уганде с 2011 по 2013 год проводился эпиднадзор за арбовирусными летучими мышами. Летучие мыши были выловлены на чердаках в нескольких местах вокруг Энтеббе и Кампалы в рамках более масштабной, общенациональной работы по отбору проб, о которой будет сообщено в других местах. Все захваты летучих мышей проводились с одобрения протокола 010-015 CDC / DVBD IACUC. Летучие мыши были пойманы на чердаках с помощью сетей тумана, с соблюдением соответствующих мер биобезопасности. При захвате летучих мышей помещали индивидуально в мешки для хранения ткани. Летучих мышей анестезировали галотаном, обескровливали с помощью пункции сердца и усыпляли передозировкой галотана и вывихом шейки матки. Кровь от летучих мышей собирали непосредственно в пробирки для отделения сыворотки, центрифугировали в поле и сразу же помещали в устройство для откачки сухого пара азота. Печень, селезенка, сердце, легкие и почки были собраны непосредственно в криопробирки и немедленно сохранены на сухом льду. В общей сложности 95 маленьких летучих мышей со свободным хвостом и 34 ангольских летучих мышей со свободным хвостом были пойманы в 2011 году, 15 маленьких летучих мышей со свободным хвостом в 2012 году и 70 маленьких летучих мышей со свободным хвостом в 2013 году.

Сначала была предпринята попытка выделения вируса из селезенки, и при положительном результате была также произведена изоляция вируса из оставшихся тканей, собранных у зараженной летучей мыши. Один вирус был выделен из 1 из 180 (0,5%) маленьких летучих мышей со свободным хвостом. Зараженной летучей мышью был взрослый мужчина, захваченный в Банга, Накивого (0 ° 04,884 'северной широты, 32 ° 27,030' восточной долготы) 23 июня 2011 года вблизи УВРИ. Инфекционный вирус был выделен из селезенки и легких; инфекционный вирус не был извлечен из сердца, печени или почек. Никакие другие ткани, оральные или фекальные мазки не были собраны у насекомоядных летучих мышей, отловленных в 2011 году. Первоначально изолят был идентифицирован как ENTV путем секвенирования ампликона флавивируса NS5 с использованием праймеров FU2 / CFD3, 12 с последующим секвенированием следующего поколения (NGS). Выделение вирусов, препаратов нуклеиновых кислот и NGS проводили, как описано ранее. 13 Новые праймеры были сконструированы из контигов, полученных из данных NGS с использованием программного обеспечения Primer 3 (Институт биомедицинских исследований Whitehead, Кембридж, Массачусетс) 14 ( Дополнительная таблица 1 ), и последовательность для всего генома была подтверждена прямым секвенированием. Последовательности концевых терминалов получали с использованием 5 ′ / 3 ′ RACE (FirstChoice® RLM-RACE, Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) в соответствии с инструкциями производителя. Вирус-специфичные RACE-праймеры представлены в Дополнительная таблица 1 , В 5 'внешней реакции использовали праймер 514R в сочетании с 5' RACE внешним праймером. Во внутренних реакциях 5 'RACE использовали праймер 388R вместе с внутренним праймером 5' RACE; амплификация также была достигнута с праймерами 15F + 388R. В 3 'внешней реакции использовали либо праймер 9882F, либо 10328F в сочетании с 3' RACE наружным праймером. 3 'внутренняя гонка не удалась. Филогенетическое древо максимального правдоподобия было сгенерировано в MEGA версии 6.0 15 (Центр эволюционной медицины и информатики, Институт биодизайна, Tempe, AZ), использующий 10,493 нуклеотидов, охватывающих последовательность открытой рамки считывания избранных геномов флавивируса, доступных в GenBank (). Анализ был выполнен с использованием полной модели замещения делеции и 1000 повторных загрузочных копий.

Дерево максимального правдоподобия, основанное на последовательности открытой рамки считывания (полное удаление пропуска). Шкала указывает на нуклеотидные замены на сайт. Значения начальной загрузки> 50% показаны (1000 повторов). CFAV = вирус слияния клеток (NC001564); DENV1 = тип денге 1 ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "M87512", "term_id": "323660", "term_text": "M87512"}} M87512 ); DENV2 = тип денге 2 ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "M20558", "term_id": "323449", "term_text": "M20558"}} M20558 ); DENV3 = тип денге 3 ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "M93130", "term_id": "323468", "term_text": "M93130"}} M93130 ); DENV4 = тип денге 4 ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "AF326573", "term_id": "12659201", "term_text": "AF326573"}} AF326573 ); EHV = вирус Эдж-Хилла ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "DQ859060", "term_id": "146411782", "term_text": "DQ859060"}} DQ859060 ); ENTV = Энтеббе вирус летучей мыши ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "DQ837641", "term_id": "112818954", "term_text": "DQ837641"}} DQ837641 ); RBV = вирус Рио-Браво ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "JQ582840", "term_id": "383215103", "term_text": "JQ582840"}} JQ582840 ); SEPV = вирус сепика (NC008719); SLEV = вирус энцефалита Сент-Луиса (NC007580); СОКВ = вирус Соколук ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "NC_026624", "term_id": "765702601", "term_text": "NC_026624"}} NC_026624 ); TBEV = вирус клещевого энцефалита (NC001672); WNV = вирус Западного Нила ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "DQ211652", "term_id": "77166600", "term_text": "DQ211652"}} DQ211652 ); WSLV = Вессельбронский вирус ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "DQ859058", "term_id": "146411778", "term_text": "DQ859058"}} DQ859058 ); YFV = вирус желтой лихорадки ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "K02749", "term_id": "336192", "term_text": "K02749"}} K02749 ); YOKV = вирус йокозы (NC005039); ZIKV = вирус Зика ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "AF013415", "term_id": "2731554", "term_text": "AF013415"}} AF013415 ).

Всего было получено 10 663 нуклеотида генома ENTV (номер доступа в GenBank {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "KP233893", "term_id": "873167403", "term_text": "KP233893"}} KP233893 ), из которых полипептид кодируется между нуклеотидами 120 и 10,355. Куно и Чанг 16 опубликован единственный другой существующий геном ENTV ( {"type": "entrez-nucleotide", "attrs": {"text": "DQ837641", "term_id": "112818954", "term_text": "DQ837641"}} DQ837641 ) секвенирован из исходного штамма IL-30. По сравнению с этой исходной последовательностью мы сообщаем о дополнительных 153 нуклеотидах в 3'-некодирующей области, но также столкнулись с трудностями при получении полной 3'-концевой последовательности. 16 В полипептидной последовательности было 76 аминокислотных замен, что привело к идентичности 97,8% на уровне аминокислот между изолятами 1957 и 2011 гг. Перед секвенированием изолят 1957 года был пассирован в мозге сосущей мыши, но более ранняя история пассажа неясна; изолят 2011 года дважды пассировали в клетках Vero. Эта дивергенция аминокислот в 2,2% находится в пределах диапазона, который наблюдался для других флавивирусов с разницей в интервале от 1 до 49 лет, 17 - 19 что указывает на относительно небольшое изменение в геноме ENTV за 54 года с момента первой изоляции.

Каждый ген имел по крайней мере одну замену аминокислоты, за исключением PrM и M (). Наибольшая процентная дивергенция между двумя изолятами была в NS4A, 10,3% (). NS4A является небольшим многофункциональным гидрофобным белком, который играет роль в модулировании ответа интерферона I типа хозяина. 20 Также было показано, что он связывается с клеточным хозяином виментина во время репликации вируса денге для стабилизации репликационного комплекса. 21 Функциональное значение этого высокого процента расхождения аминокислот еще предстоит определить, но Хан и другие 22 предположил, что большое количество аминокислотных замен может быть размещено среди небольших гидрофобных полипептидов NS2A, NS2B, NS4A и NS4B, пока профиль гидрофобности остается неизменным. В этом случае изменения профиля гидрофобности NS4A между этими двумя изолятами были несущественными. Два из 76 аминокислотных изменений произошли в соединениях NS2A / NS2B и в NS4A / 2K. Длины всех генов были идентичны тем, о которых сообщалось ранее. 16

Таблица 1

Длина гена (aa) Количество замен aa (%) C 119 6 (5,0) PrM 93 0 (0,0) M 75 0 (0,0) E 489 5 (1,0) NS1 353 11 (3,1) NS2A 228 9 (3,9) NS2B 130 1 (0,8) NS3 620 7 (1,1) NS4A 126 13 (10,3) 2K 23 1 (4,3) NS4B 249 6 (2,4) NS5 906 17 (1,9)

Филогенетические отношения между ENTV и вирусом желтой лихорадки (YFV) очень интересны, так как YFV исторически является одним из наиболее важных с медицинской точки зрения флавивирусов, переносимых комарами. Хотя ENTV филогенетически относится к флавивирусам, переносимым комарами, и исторически относится к группе YFV, 16 , 23 он был выделен только дважды от летучих мышей (1957 и 2011) и никогда от комаров или людей, пойманных в дикой природе. подтверждает филогенетическое расположение обоих изолятов ENTV, как опубликовано ранее, 12 , 16 , 23 а также поддерживает недавнее размещение Международного комитета по таксономии вирусов ENTV в группе вирусов летучих мышей Entebbe, родственной группе YFV. 24 В соответствии с этой новой группировкой ENTV поделилась наиболее близкой гомологией последовательности с вирусом Соколук, который был выделен из насекомоядных летучих мышей и мягких клещей в Кыргызстане. 25 Эксперименты на патогенность не проводились в рамках этого исследования, но первоначально было показано, что ENTV является патогенным для взрослых мышей при интрацеребральном введении и для мышей-младенцев как внутримозговым, так и внутрибрюшинным путями. 4 , 5 По нашему опыту, это вызывало цитопатические эффекты и вызывало появление бляшек на клетках Vero. ENTV также размножается в клетках комаров. 26 Несмотря на то, что более полувека оставаясь малоизвестным вирусом, связанным с летучими мышами, ENTV продолжает циркулировать среди маленьких летучих мышей с свободным хвостом в Уганде. Дальнейшее изучение этого вируса позволит получить ценную информацию об экологических и генетических факторах, регулирующих эволюцию и передачу флавивирусов, переносимых летучими мышами и комарами.

Похожие

Фотопрезентации в конце учебного года для учителя - вдохновение
Что подарить классному учителю по случаю окончания учебного года? Сколько потратить на подарок? Это вопросы, на которых родители детей школьного возраста проводят сон. Если эти вопросы вы себе задаете, то у нас есть готовый ответ для вас. Мы подготовили 5 креативных подарков для педагога.
Библиотека по вопросам губернатора Январь 2019 года Основные события
Основные события этого месяца: Zentangle, медицинская конопля, энергия ветра, остров испытаний и природа! «Зацените» эти многочисленные бесплатные программы и мероприятия в Библиотеке университетского филиала, 4155 Губернатор Драйв; В наших общественных библиотеках можно сделать гораздо больше, чем просто проверять книги. Показанное событие этого месяца: Друзья
Бесплатный Panda Antivirus Pro 2016 с лицензионным ключом на 180 дней
Ищете бесплатный антивирус? Здесь у меня есть еще один бесплатный антивирус для вас. Это Panda Antivirus Pro 2016. Это не типичный бесплатный антивирус, как бесплатный AVG Antivirus или Антивирус Касперского для России и Украины , Это платный антивирус, который вы получаете бесплатно, например Бесплатный AVG Internet
Лучший антивирус 2019 | Платные и бесплатные варианты проверены | TechRadar
Посмотрим правде в глаза ... мы не ближе к победе киберпреступников и хакеров, которые изводят интернет, чем мы были десять лет назад. На самом деле, киберпреступность растет год от года. Поэтому, как всегда, важно, чтобы ваш компьютер и мобильные устройства были защищены лучшим антивирусом. Возможно, вы наиболее знакомы с такими именами, как Norton, McAfee и AVG, но действительно ли они лучше? Мы протестировали и рассмотрели новейшие пакеты - как премиум, так и бесплатные антивирусы
ТЕСТ | Клавиатура Logitech K780 и мышь MX Anywhere 2S
... годаря чему наши руки не потеют чрезмерно при использовании мыши. фото mobiManiaK.pl Что привлекает внимание, так это отличный и чрезвычайно функциональный рулон , который работает в двух режимах и позволяет быстро прокручивать большие участки текста
Подарки на год - мои проверенные снимки - Беззаботная мама - блог о жизни и материнстве
Постоянные читатели блога понимают, что моя дочь закончила ее год назад. Вот почему многие из вас спрашивают меня о подарке на первый день рождения моего ребенка. У меня есть несколько проверенных на опыте игрушек, но я также спросил друзей о том, что лучше для них. И я скажу вам, что у нас действительно классный список. При выборе подарка на год стоит обратить внимание на несколько вещей. Прежде
Вредоносное
Вредоносное ПО редактировать ]
Всплывающие объявления - Google объявляет им войну
Создатели крупнейшего в мире поискового движка не будут благосклонно смотреть на создателей сайтов, которые любят всплывающие окна. Сайты, показывающие всплывающую рекламу, будут менее оценены алгоритмами Google. Всплывающая реклама надоедает. Пользователи имеют дело с ними по-разному, устанавливая на компьютерах рекламные блоки, но настоящим кошмаром рядом с автоматически воспроизводимым видео являются всплывающие окна на мобильных устройствах. К счастью,
Лучшие HDMI-кабели 2019 года - совместимые кабели 4K, 3D и HDR
Как выбрать кабель HDMI HDMI - это телевизионный отраслевой стандарт для компонентов высокой четкости. Это универсальный кабель для передачи аудио- и видеосигналов от проигрывателя Blu-ray (или игровой консоли, компьютера или любого другого устройства) на телевизор. Мы потратили 15 часов на исследование кабелей HDMI, чтобы найти лучшие высокоскоростные варианты. После добавления исследования с нашим собственным техническим опытом, мы рекомендуем

Комментарии

Что подарить классному учителю по случаю окончания учебного года?
Что подарить классному учителю по случаю окончания учебного года? Сколько потратить на подарок? Это вопросы, на которых родители детей школьного возраста проводят сон. Если эти вопросы вы себе задаете, то у нас есть готовый ответ для вас. Мы подготовили 5 креативных подарков для педагога. Каждый из них будет отличным подарком к празднованию окончания учебного года. Не забудьте своевременно оформить заказ, чтобы обеспечить своевременную доставку товара. Фото картина
Какой совет вы бы дали другим компаниям, участвующим в Черной пятнице этого года?
Какой совет вы бы дали другим компаниям, участвующим в Черной пятнице этого года? Не пренебрегайте своими лояльными потребителями из-за тех, кто покупает что-то только один день.
Так почему же мы опустили его с первой строчки нашего списка, на позицию, которую он занимал последние два года?
Так почему же мы опустили его с первой строчки нашего списка, на позицию, которую он занимал последние два года? Это постоянное издевательство. Существует определенный уровень всплывающих окон и рекламных объявлений, приемлемых для бесплатного продукта, и Avira начала пересекать черту. Это не так обременительно, как некоторые, - вспоминается чрезмерно восторженный интерфейс Comodo, - но загрузка вашего компьютера, чтобы увидеть, как Avira снова кричит на вас, раздражает. Обзор

Сколько потратить на подарок?
Возможно, вы наиболее знакомы с такими именами, как Norton, McAfee и AVG, но действительно ли они лучше?
Что подарить классному учителю по случаю окончания учебного года?
Сколько потратить на подарок?
Какой совет вы бы дали другим компаниям, участвующим в Черной пятнице этого года?
Так почему же мы опустили его с первой строчки нашего списка, на позицию, которую он занимал последние два года?
Так почему же мы опустили его с первой строчки нашего списка, на позицию, которую он занимал последние два года?
2011.11.19
Карта